在胚胎學研究、生殖醫學和動物實驗中，胚胎分割（Embryo micromanipulation）是一項非常精細的操作。要想在顯微鏡下清晰、準確地分割胚胎，不僅需要合適的儀器和顯微鏡類型，還要配合精確的顯微操控系統與穩定的成像條件。

一、胚胎分割是什么

胚胎分割是指在早期胚胎階段（如受精卵、2細胞或4細胞期）進行的顯微操作，通過切割、移核、注射等手段，實現研究或應用目的。例如：

動物克隆實驗中的細胞核移植；

胚胎發育規律研究；

胚胎干細胞提??；

體外受精后胚胎篩查與移植前檢測。

在這些過程中，科研人員必須通過顯微鏡直接觀察胚胎形態，并利用微操作針完成精確操作。因此，顯微鏡的選擇直接影響到分割效果與圖像的清晰度。

二、用于胚胎分割的顯微鏡類型

體視顯微鏡（Stereo Microscope）

這是胚胎分割中最常用的顯微鏡類型。

原理：通過兩個光學通道形成立體視覺，讓操作者有深度感。

特點：視野寬、景深大、操作空間充足。

適合階段：受精卵、2細胞、4細胞期等體積較大的胚胎。

優點：便于顯微操作針、顯微剪、移液管的定位和進針。

缺點：放大倍數相對較低（常在10×~100×），無法觀察亞細胞結構。

若配合高清攝像頭和冷光源，可清楚地觀察胚胎的形態輪廓及分裂界面，非常適合進行“好看”的視覺拍攝與記錄。

倒置顯微鏡（Inverted Microscope）

倒置顯微鏡常用于胚胎培養與顯微注射。

原理：物鏡位于下方，樣品在培養皿上方，適合觀察液體中樣品。

優點：光路穩定，可接入恒溫培養系統；能搭載微操作儀。

應用：適合觀察胚胎的分裂情況、囊胚形成及顯微注射操作。

放大倍數：通常40×~400×。

如果安裝相差或DIC差分干涉系統，能在不染色的情況下清晰呈現胚胎的細胞邊界，分割時非常直觀。

顯微操控系統（Micromanipulator）配合顯微鏡使用

胚胎分割操作必須配合顯微操控儀使用。

顯微操控儀安裝在顯微鏡兩側，帶有微動控制桿、顯微針、吸持管等裝置，可精準移動至細胞級別的距離（精度可達微米）。

在顯微鏡下通過微操控，可完成胚胎切割、核移植、注射或抽吸等操作。

熒光顯微鏡（Fluorescence Microscope）

若研究需要觀察胚胎中特定蛋白或基因標記，可以使用熒光顯微鏡。

通過標記胚胎中的細胞核或膜結構，可清楚區分細胞邊界，有助于精準分割。但此時的“好看”更多是科研視覺效果，而非自然形態。

三、顯微鏡下讓胚胎“好看”的關鍵因素

光照與對比度

胚胎是透明的，過強的光容易導致反射或炫光。建議使用冷光源（LED或光纖），并調整角度以獲得柔和、對比明顯的圖像。

對于倒置顯微鏡，可使用相差光學或DIC干涉光學，能讓細胞輪廓更立體。

顯微鏡的穩定性與溫控系統

胚胎操作需要在接近體溫的環境下進行（通常37°C），因此必須配備恒溫載物臺或加熱顯微鏡平臺，以防止胚胎因溫差而損傷。

操作空間與角度

分割時顯微針或吸管需要一定角度進入胚胎，因此體視顯微鏡更適合立體操作；倒置顯微鏡則適合在培養皿底部操作。根據實驗需求選擇更合適的角度和顯微系統，圖像效果會更好。

圖像記錄系統

若要拍攝“好看”的分割畫面，應配備高分辨率顯微攝像頭，并搭配電腦圖像采集軟件。適當調整曝光、白平衡和背景光，可以使胚胎結構更加清晰自然。

四、推薦的典型組合

在科研和胚胎操作實驗室中，常見的理想組合是：

徠卡、尼康、奧林巴斯或蔡司體視顯微鏡 + 顯微操控儀（Narishige、Eppendorf等品牌） + 冷光源與攝像系統。

若是體外受精或胚胎顯微注射，則用倒置顯微鏡 + 微操控系統 + 恒溫培養箱。

這樣的組合既能提供足夠的空間操作，又能在顯微鏡下清晰地觀察胚胎細胞界限，既“好看”，又“好用”。

總結

在顯微鏡下分割胚胎，要想既操作精準又畫面清晰，最推薦使用體視顯微鏡或倒置顯微鏡，配合顯微操控系統與穩定光源。體視顯微鏡能提供立體視覺，方便操作；倒置顯微鏡則適合培養和注射。兩者若再結合高分辨率相機和溫控平臺，就能在顯微鏡下獲得既清晰又真實的胚胎分割畫面。